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第七十八章 地下实验室基地的成果（第4页）

作为一个半大小的abc转运体，phabcg具有单一膜结构域和单一核苷酸结合结构域，可以作为同源或异源二聚体挥作用。

由于没有其他半大小的abcg基因在花中像phabcg那样上调，因此假设phabcg作为同二聚体起作用。

当进行色谱时，phabcg在kda标记物前洗脱，与洗涤剂胶束（okda）中预测的同型二聚体尺寸（xkda）一致。

其次作者选择了苯甲酯和苯甲醇作为底物（矮牵牛花释放的主要voc成分）。

在用c标记的底物孵育表达phabcg的对照和转基因by-系时，测量细胞相关的放射性，对应于被动扩散进入细胞和主动运输出细胞之间的差异。

与对照细胞相比，在转基因by-细胞中观察到的细胞相关放射性降低，这表明phabcg将甲酸酯和苯甲醇运输出细胞（图，a和c）。

另外两个转基因by-细胞系也显示出类似的结果（图c）。

表达by-抗体的细胞系sc（）作为阴性对照，表现与野生型细胞相似。

钒酸盐是一种已知的abc转运蛋白抑制剂，在表达phabcg的by-细胞系中，苯甲酸甲酯的保留量增加了，证实了转运的活性（图b）。

用标记的单萜薄荷醇和二萜核醇类似物[h-十氢--羟基-，，，a-四甲基--萘乙醇，烟草ntpdr转运体的底物进行转运试验显示，表达phabcg的细胞和野生型by-细胞之间没有差异（图c）。

这一结果表明phabcg转运苯丙类和苯类化合物。

图phabcg运输活性验证

其他abcg转运体候选者筛选：未筛选到功能基因

在rna-seq数据集中确定了个额外的abcg转运体候选者。

在植入后的第天，所有候选基因的转录水平都低于phabcg，只有两个候选基因（ph和ph）在第天比第天上调。

ph的表达量为phabcg的o，而ph的表达量为phabai下调ph对voc排放或内部池没有影响。

通过rna-seq鉴定的所有矮牵牛花abcg转运蛋白和已知功能的半大小拟南芥转运蛋白的系统育分析显示，phabcg具有一个与矮牵牛花密切相关的蛋白pho（氨基酸同源），没有拟南芥同源物。

pho的表达量是phabcg的o，表明它对voc排放的贡献很小，如果有的话。

另外两个phabcg同源物（ph和ph，与phabcg共享约g）聚集，并与phabcg和pho单独聚集。

模型预测验证：累积的vocs对膜完整性有不利影响

为了验证预测的模型，累积的vocs对膜完整性有不利影响，作者用两种具有不同作用模式的化合物对日龄野生型和phabai花的牵牛花花瓣进行了染色。

第一种是碘化丙啶，只有在质膜被破坏时才扩散到细胞中并染色核酸。

第二种是双醋酸荧光素，它穿过完整的细胞膜并保持无色，直到醋酸部分被细胞内酯酶除去。

去乙酰化的荧光素是荧光的，不能穿过完整的细胞膜。

结果现在phabai花瓣中，碘化丙啶染色细胞核，与累积的vocs对质膜的损伤一致（图a）。

与这种效果类似，野生型花在喂食高浓度（至o）苯甲醛时也表现出类似的染色。

phabai花瓣中荧光素染色较少（图b），为细胞膜破坏提供了独立的证据。

与对照相比，phabai系的花更小，鲜重也更轻。

然而，转基因和野生型花瓣表皮锥形细胞的扫描电镜显示，细胞基部直径和细胞形状没有差异。

这表明这些细胞的分化和扩张生在voc积累之前，因此不受影响。

phabcg下调对矮牵牛花细胞膜完整性的影响

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